茶氨酸生物合成基因工程菌的质粒稳定性研究

doi:10.13305/j.cnki.jts.2008.02.001

茶叶科学 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (2): 147-151.doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.02.001

茶氨酸生物合成基因工程菌的质粒稳定性研究

陆文渊, 成浩^*, 王丽鸳, 周健

中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心,国家茶树改良中心,浙江杭州,310008

收稿日期:2007-12-27 修回日期:2008-03-03 出版日期:2008-04-15 发布日期:2019-09-16
通讯作者: *chenghao@mail.tricaas.com
作者简介:陆文渊（1982— ）,男,浙江海宁人,硕士研究生,主要从事茶叶生物工程研究。
基金资助:
浙江省科技计划项目（2007C22074）,中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（0032007219）

Study on the Plasmid Stability of the Genetically Engineered Escherichia coli Bacteria Strain for the Biosynthesis of Theanine

LU Wen-yuan, CHENG Hao^*, WANG Li-yuan, ZHOU Jian

Research Center for Tea Germplasm and Improvement, Tea Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences, National Center for Tea Improvement, Hangzhou 310008, China

Received:2007-12-27 Revised:2008-03-03 Online:2008-04-15 Published:2019-09-16

摘要/Abstract

摘要： 研究了茶氨酸生物合成基因工程菌重组质粒pET32a-GGT的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代100代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;但在无抗生素选择压力下,连续传代20代后开始出现质粒丢失的细胞,连续传代100代后18%的细胞含有正常质粒,因此,表现出一定的分裂不稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分裂稳定性,γ-谷氨酰转肽酶的活性为4.64 U/ml,催化合成茶氨酸的产量为35.18 g/L。

关键词: 茶氨酸, γ-GGT(γ-谷氨酰转肽酶), 基因工程菌, 质粒稳定性

Abstract: The stability of the recombinant plasmid pET32a-GGT in the genetically engineered E. coli bacteria strain for the biosynthesis of theanine was in investigated this article. Result showed that the recombinant plasmid didn’t appear obvious gene deletion, showed structural stability after 100 generations. However, the plasmid is showed segregational instability, the plasmid-free cells appeared after 20 generations, and 18% cells was plasmid-harboring cells after 100 generation under no Amp selection pressure. It was structural and segregational stability under optimizing culture medium and condition during the fermentation process, with activity ofγ-GGT 4.64 U/ml and yield of theanine 35.18 g/L.

Key words: theanine, γ-GGT (γ-Gltamyltranspeptidase), genetically engineered E. coli bacteria strain, plasmid stability

中图分类号:

TS272
Q523

陆文渊, 成浩, 王丽鸳, 周健. 茶氨酸生物合成基因工程菌的质粒稳定性研究[J]. 茶叶科学, 2008, 28(2): 147-151. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.02.001.

LU Wen-yuan, CHENG Hao, WANG Li-yuan, ZHOU Jian. Study on the Plasmid Stability of the Genetically Engineered Escherichia coli Bacteria Strain for the Biosynthesis of Theanine[J]. Journal of Tea Science, 2008, 28(2): 147-151. doi: 10.13305/j.cnki.jts.2008.02.001.

参考文献

[1] 吕毅, 郭雯飞, 倪捷儿, 等. 茶氨酸的生理作用及合成[J]. 茶叶科学, 2003, 23(1): 1~5.
[2] 高小红, 袁华, 喻宗沅. 茶氨酸的研究进展[J]. 化学与生物工程, 2004(1): 7~9.
[3] 李平, 宛晓春, 张正竹. 生物合成茶氨酸的研究进展及构建基因工程菌合成荼氨酸的可行性探讨[J]. 食品与发酵工业, 2004, 30(1): 71~75.
[4] 王贤波, 成浩, 王丽鸳, 等. 茶氨酸生物合成工程菌构建[J]. 茶叶科学, 2007, 27(1): 61~66.
[5] M Karbasi, T Keshavarz.Effect of dilution rate on the stability of TOL plasmid pTK0 in Pseudomonas putida PPK1[J]. Biotechnology Letters, 1997, 19(10): 985~988.
[6] 吴乃虎. 基因工程原理第2版(M). 北京: 科学出版社, 1998.
[7] Nayak D P, Vyas V V.Improved stability and expression of a recombinant shuttle plasmid in Escherichia coli during fedbatch cultivation[J]. World journal of Microbiology, 1999, 15: 65~71.
[8] Xiaoli Zhang, Zhaojie Xia, Binxia Zhao.Enhancement of plasmid stability and protein productivity using multi-pulse, fed-batch culture of recombinant Saccharomyces cerevisiae[J]. Biotechnology Letters, 2002, 24: 995~998.
[9] GC Gurakan, A. Bayindirli, ZB Ogel, et al. Stability of a recombinant plasmid carrying a-amylase gene in Bacillus subtilis[J]. World Journal of Microbiology & Biotechnology, 1998, 14:293~295.
[10] 邱英华, 沈益, 王玉海, 等. Cecropin-X发酵过程中工程菌质粒稳定性的研究[J]. 微生物学报, 2004, 44(3): 390~392.
[11] J 萨姆布鲁克, D W拉塞尔. 分子克隆实验指南第3版[M], 黄培堂, 王嘉玺, 朱厚基, 等译. 北京: 科学出版社, 2002.
[12] 张泉, 薛方明, 于可响, 等. 质粒pcDNKLYZ在发酵过程中的稳定性[J]. 农业生物技术学报, 2006, 14(1): 113~116.
[13] 林智, 杨勇, 谭俊峰. 茶氨酸提取纯化工艺研究[J]. 天然产物研究与开发, 2004, 16(5): 442~447.

[1]	黄秋萍, 谢晨阳, 李新宇, 金斌, 曾榛, 钱波, 戴玲, 宋家乐. L-茶氨酸改善来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠临床症状[J]. 茶叶科学, 2021, 41(6): 831-842.
[2]	陈美艳, 刘芬, 林勇, 左高隆, 左颖鹏, 刘仲华. L-茶氨酸对CUMS抑郁大鼠海马和肠道损伤的干预作用研究[J]. 茶叶科学, 2021, 41(4): 511-524.
[3]	毛鹏, 王丽鸳, 白培贤, 韦康, 阮丽, 张亚真, 成浩. 类茶氨酸合成酶基因家族在番茄中的鉴定及表达研究[J]. 茶叶科学, 2021, 41(2): 173-183.
[4]	金可, 黄建安, 熊立瑰, 刘硕谦, 覃小洪, 彭靖, 李银花, 李娟. 黄化变异茶树石门黄叶理化分析及茶氨酸相关基因表达研究[J]. 茶叶科学, 2021, 41(1): 40-47.
[5]	曾立, 肖文军. L-茶氨酸防治脑疾病研究进展[J]. 茶叶科学, 2019, 39(2): 193-202.
[6]	彭影琦, 肖文军, 张盛, 袁冬寅, 林玲, 周阳, 龚志华. L-茶氨酸对小鼠肠道形态结构及游离氨基酸的影响[J]. 茶叶科学, 2019, 39(1): 43-54.
[7]	朱城波, 吴小妹, 冯丽霞, 黄象鹏, 庞林江, 杨虎清, 方正伟, 王颖, 赖姝毓, 张宜明. 直读显色快速检测绿茶中的茶氨酸[J]. 茶叶科学, 2018, 38(3): 244-252.
[8]	李小杰, 马建强, 姚明哲, 陈亮. 茶氨酸合成酶基因的SNP挖掘和遗传定位[J]. 茶叶科学, 2017, 37(3): 251-257.
[9]	郭晨, 刘林峰, 向奕, 罗莉, 林玲, 肖文军. L-茶氨酸改善热应激引起的小鼠组织损伤和氧化逆境[J]. 茶叶科学, 2017, 37(1): 17-24.
[10]	刘遵莹, 刘秋玲, 邓燕莉, 陈凌, 肖文军. L-茶氨酸对产肠毒素大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肠道的保护作用研究[J]. 茶叶科学, 2016, 36(5): 469-476.
[11]	刘秋玲, 龚志华, 陈凌, 刘遵莹, 邓燕莉, 陈栋, 肖文军. L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肝脏的保护作用研究[J]. 茶叶科学, 2016, 36(5): 484-490.
[12]	彭彬, 刘仲华, 林勇, 林海燕, 黄建安. L-茶氨酸改善慢性应激大鼠抑郁行为作用研究[J]. 茶叶科学, 2014, 34(4): 355-363.
[13]	刘晓慧, 揭国良, 林康, 吴媛媛, 王岳飞, 屠幼英. EGCG和茶氨酸对细胞氧化损伤的协同保护和修复作用研究[J]. 茶叶科学, 2014, 34(3): 239-247.
[14]	虞希冲, 杨伟, 吴波拉. 茶氨酸经下丘脑腹外侧核抑制雌性小鼠摄食与胃排空作用研究[J]. 茶叶科学, 2013, 33(5): 429-435.
[15]	谭俊峰, 林智, 彭群华, 郭丽, 吕海鹏. 茶氨酸复合制剂缓解体力疲劳功能评价[J]. 茶叶科学, 2012, 32(6): 530-534.

茶氨酸生物合成基因工程菌的质粒稳定性研究

Study on the Plasmid Stability of the Genetically Engineered Escherichia coli Bacteria Strain for the Biosynthesis of Theanine

PDF (PC)

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

Metrics

本文评价

推荐阅读 10